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公司新聞

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

文章出自: 點擊量:618日期:發布時間

組織固定

組織固定的目的在于保存組織。組織離體后要盡快地用固定液浸泡,以達到滲透組織的目的,并使組織具有一定的硬度。這樣不僅可以防止組織的自溶改變,而且還可以防止組織中的有效成分在后續的一系列處理過程中改變性狀。所以,固定標本尤其是固定大塊或條索狀標本時要盡可能的保持標本正常時的狀態,不得發生扭曲。

目前,10%中性緩沖福爾馬林是應用最廣的常用固定液之一[1,2],它對大多數的病理標本都具有良好的固定作用,穿透速度快,組織硬化程度小。組織經10%中性緩沖福爾馬林固定后,可以保存數月而不會發生不良變化,且細胞核和細胞質的微細部分均保存良好,多數也可進行免疫組化染色(圖1-5)。

目前,不少科室在使用自動化儀器設備時,因為程序設置不當,標本沒有足夠的時間在固定液停留,有的甚至用乙醇脫水直接替代了固定步驟,導致組織固定效果不佳.另在戊二醛,、Helly,、Zenker,、Bouin中固定的組織,必須及時取出沖洗,保留在適當的液體中。如果放置時間過長可能會導致固定過度,甚至影響染色[3](圖6)。

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

圖1.外科手術結腸組織標本,標本離體后立即投入固定液; 固定液首先接觸上皮部分,有效地保存了上皮及絨毛結構,并有效地阻止了細胞的自溶和腐敗。

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

圖2.組織取自動物實驗的消化道腸黏膜,自溶引起上皮與基底部分脫落和分離,腺體結構欠完整。

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圖3.肺組織切片,組織結構不良。由于沒有良好的固定,組織正常的結構及相互關系在組織處理過程中不復存在。

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

圖4.肺組織固定良好,組織結構完整。

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圖5.腸黏膜組織固定不佳,細胞成分未被有效保存,染色差,特別是腺體部分的細胞核與細胞質深染,缺乏明顯對比。

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圖6.腸黏膜組織固定良好。腺體結構完整,細胞清晰,細胞核與細胞質染色對比鮮艷。

組織處理

組織處理包括三個主要步驟:脫水、透明和浸透,目的在于從組織標本中移去多余的水分,引入一種遇熱融化、遇冷凝結的介質(如石蠟),有利于組織切片[4]。

脫  水

脫水不徹底是組織處理最常見的問題之一。脫水的原理和機制有兩方面:一是使用親水性的試劑,從組織中吸收水分;二是使用溶水性的試劑,不斷從組織中溶解組織中的液體。乙醇是常規組織制片最常用的脫水劑,如果時間寬裕,可從低濃度開始多換幾次,這樣可防止組織脫水過度造成扭曲。如果時間緊湊,可從95%乙醇開始,接著行無水乙醇脫水。通常的方案是從60%~65%乙醇開始,換2次95%乙醇,2次無水乙醇。如果使用的乙醇濃度高于70%,中性緩沖福爾馬林中的磷酸鹽,將會在組織中沉積,沉積的結晶會妨礙組織切片。所以,組織脫水時應盡量避免在高濃度的乙醇如無水乙醇中停留的時間過長,否則會造成組織過硬、扭曲,影響切片[5](圖7、8)。

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

圖7、8.蠟塊中的淋巴結組織未充分脫水和透明導致浸蠟不完全:白色區域較軟,石蠟未能浸透,蠟塊將難以切片。

透  明

切片著色不均多數是因為透明或浸透的蠟液中混有一定的水分。組織開放式處理,空氣中濕度較大;組織密閉式處理,固定液中的水分,或因加溫引起的水珠,滴入液中。這類問題在小標本中比較多見,如皮膚、乳頭狀瘤。胃、腸、黏膜活檢等標本[3]??梢愿挠脤λ畬捜荻刃源笠恍┑耐该鲃?,如用甲苯替代二甲苯來解決此類問題(圖9、10)。

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

組織固定知多少?- 組織固定與處理常見問題與對策

圖9、10.腸黏膜活檢小標本,深部肌層和腺體有著色不均的現象,部分區域組織發白,可能為浸蠟時有水珠滴入,影響浸蠟質量,導致切片染色不均。

浸  蠟

真空和加溫是現代化組織處理儀器提供的有利條件和手段,但是應該慎用。不少單位在使用現代化的儀器進行組織處理時,因使用的程序不當,標本的處理容易出現過度或不足的現象。根據我科使用的情況,建議推薦使用如下程序,便于大家在設計使用時參考:

(1)固定程序2次,固定液為10%中性緩沖福爾馬林,時間為45 min,設置加溫50℃,加壓,攪拌。

(2)脫水程序8次,前4次為95%乙醇,后4次為100%乙醇,時間均為60 min,僅在最后一次的95%和100%乙醇設置加壓、攪拌。

(3)透明程序2次,第一次為硬脂酸和石蠟,比例為3:2,第一次為硬脂酸和石蠟,比例為2:3,時間均為60 min,均設置加溫65℃。加壓,攪拌。

(4)浸蠟程序2次,均為56~58℃純蠟,時間均為為60 min,設置加溫65℃,加壓,攪拌。


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